DNA含量檢測試劑盒，脫氧核糖核酸檢測試劑盒

DNA含量檢測試劑盒

DNA Content Quantitation Assay(Cell Cycle)

規(guī)格：20T/50T

保存：-20℃避光保存，一年有效。

試劑組成 ：

產品說明：

細胞周期是指連續(xù)分裂細胞從一次有絲分裂結束到下一次有絲分裂結束所經歷的整個過程。在這個過程中，細胞遺傳物質復制并加倍，且在分裂結束時平均分配到兩個子細胞中去。細胞周期又可以分為間期和有絲分裂期，細胞間期常劃分為休眠期（G 0 ），DNA 合成前期（G 1 ），DNA 合成期（S），DNA 合成后期（G 2 ），整個周期可表示為 G 1 →S→G 2 →M。DNA 周期檢測可用來反應細胞周期的各個期的狀況，即細胞增殖狀況。利用細胞內 DNA 能夠和熒光染料（如碘化丙啶 PI）結合的特性，細胞各個時期其 DNA 含量不同從而結合的熒光染料不同，流式細胞儀檢測的熒光強度也不一樣。

    細胞發(fā)生凋亡時，由于胞漿和染色質濃縮，核裂解，產生凋亡小體，使細胞的光散射性質發(fā)生變化。在細胞凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，對 90°角光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期，前向角和 90°角光散射的信號均降低。因此可以通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化來觀察凋亡細胞。用 PI 對細胞進行染色，凋亡細胞由于總 DNA 量降低，于正常 G 0 /G 1 細胞群前出現(xiàn) DNA 低染細胞群，即G 1峰前出現(xiàn)亞二倍體峰（sub-G 1）,即細胞凋亡群。

    本試劑盒可應用于培養(yǎng)細胞（懸浮、貼壁）的 DNA 含量（細胞周期）檢測。

使用方法 ：（ 僅供參考 ）

1、 用適當?shù)姆椒ㄕT導細胞凋亡，同時設立陰性對照組，并收集細胞。

2、 用 PBS 洗滌細胞一次，1500rpm，5min 離心收集，調整細胞濃度為 1×10⁶/ml,取 1ml 單細胞懸液。

3、 制備的單細胞懸液離心后，去除上清，在細胞中加入70%預冷乙醇 500ul 固定2小時至過夜，4℃保存，染色前用PBS洗去固定液；如需要，細胞懸液可用200目細胞篩網(wǎng)過濾一次。

4、 細胞沉淀中加 100µl RNase A 溶液，重懸細胞，37℃水浴 30min。

5、 再加入 400µl PI 染色液混勻，4℃避光孵育 30min。

6、 上機檢測，記錄激發(fā)波長 488nm 處紅色熒光。

注意事項 ：

碘化丙啶（PI）染色液保存和使用過程中應注意避光。

PI 有毒，操作時應戴手套，并避免污染。

熒光染料都存在淬滅問題，建議染色后盡量當天完成檢測。

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